جداسازی سلول‌های B با استفاده از نانوذرات مغناطیسی و بررسی اثر رنگ ‌آمیزی سلول‌ها و مقدار نانوذرات بر جداسازی آنها

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسنده

گروه مهندسی پلیمر دانشگاه آزاد اسلامی واحد شیراز، شیراز، ایران

10.22034/ijche.2024.423328.1364

چکیده

امروزه از نانوذرات و میکروذرات مغناطیسی در کاربردهای مختلف پزشکی و درمان مانند MRI، ترمیم بافت، رهایش دارو، هایپرترمی و جداسازی سلول‌ها استفاده می‌شود. یکی از مهم‌ترین سلول‌هایی که باید جداسازی شود، سلول‌های لنفاوی هستند، زیرا نقش بسیار مهمی در درمان سرطان‌های لنفوم و ایمونوتراپی دارند. لذا در این مطالعه سلول‌های B از PBMCs با استفاده از نانوذرت مغناطیسی اکسید آهن پوشش داده شده با پکتین جدا شده‌اند. به منظور جداسازی هدفمند سلول‌های B، آنتی‌بادی FITC anti-human CD20 با استفاده از EDC/NHS به نانوذرات متصل شده و توسط فلوسایتومتری آنالیز شده است. در مرحله بعد سلول‌های B با نانوذرات حاوی آنتی بادی از بقیه سلول‌ها جدا شده و با فلوسایتومتری بازده جداسازی بررسی شده است. نتایج فلوسایتومتری نشان می‌‌‌‌‌دهد که آنتی‌بادی به نانوذرات متصل شده و میزان MFI آن برابر با 55 می‌باشد. بازده جداسازی سلول‌ها 75 تا 82 درصد می‌باشد. همچنین مشخص گردید که با رنگ‌ آمیزی سلول‌ها بعد از جداسازی، میزان بازده واکنش تا حدودی نسبت به حالت بدون رنگ‌ آمیزی و آنالیز مستقیم سلول‌ها بعد از شستشو با فلوسایتومتری از 81 درصد به 76 درصد کاهش می‌یابد. علاوه بر این نتایج نشان داد که مقدار مناسب نانوذرات در واکنش با سلول‌ها 50 میکرولیتر می‌باشد و کاهش آن موجب کاهش 30 درصدی در بازده جداسازی می‌گردد.

کلیدواژه‌ها

موضوعات


عنوان مقاله [English]

Isolation of B cells using magnetic nanoparticles and investigating the effect of cell staining and the amount of nanoparticles on their isolation

نویسنده [English]

  • amir hossein haghighi
Department of Polymer Engineering, Shiraz Branch, Islamic Azad University, Shiraz, Iran
چکیده [English]

Today, magnetic nanoparticles and microparticles are used in various medical and therapeutic applications such as MRI, tissue repair, drug release, hyperthermia, and cell isolation. One of the most important cells to isolate are lymphoid cells, because they play a very important role in the treatment of lymphoma cancers and immunotherapy. Therefore, in this study, B cells were isolated from PBMCs using iron oxide magnetic nanoparticles coated with pectin. In order to isolate B cells, FITC anti-human CD20 antibody was attached to nanoparticles using EDC/NHS and analyzed by flow cytometry. In the next step, the target cells are separated from others cells with nanoparticles containing antibodies, and the rate of isolation is checked by flow cytometry. The results of flow cytometry show that the antibody is attached to the nanoparticles and its MFI is equal to 55. It was also found that by staining the cells after isolation, the reaction efficiency is somewhat reduced from 81% to 76% compared to the state without staining and direct analysis of the cells after washing by flow cytometry. In addition, the results showed that the appropriate amount of nanoparticles in the reaction with cells is 50 microliters and its reduction causes a 30% loss in the separation efficiency.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Magnetic Nanoparticles
  • Pectin
  • B cells
  • Flow cytometry test